近年来，含氯制剂在防治水产动物疾病方面发挥了巨大的作用。但是，它们往往存在溶解性差、刺激性强以及安全性低等弊端，使用的效果常受到水体酸碱度和有机化合物的影响，聚六亚甲基胍（polyhexamethylene guanide，PHMG）作为一种新型的多用途高分子聚合物，具有无色无味，易溶于水，理化性质稳定等优点。它是一种阳离子表面活性剂，呈正电性。因此，很容易被通常呈负电性的各类细菌、病毒所吸附，从而抑制了它们的分裂繁殖功能，且聚合物形成的薄膜堵塞了微生物的呼吸通道，使微生物迅速窒息而死。同时，由于PHMG是高分子聚合物，使其胍基活性提高，且各类细菌不会对其产生抗药性。由于其独特的结构和性能，在食品行业、环境消毒等方面受到了关注，近年来，在水产养殖业也在一定程度上得到应用。现已有聚六亚甲基胍对中国对虾（Fenneropenaeus chinensis）、某些海水养殖品种（南美白对虾Litopenaeus vannamei、大菱鲆Scophthatmus maximus、刺参Apostichopus japonicus和杂色鲍Haliotis dirensicolor）的毒性研究报道。江浙一带地区的实际淡水养殖模式中已经开始使用PHMG来预防和治疗异育银鲫（Carassius auratus gibelio）的鳃出血等疾病，但未见相关报道。为此，本文以异育银鲫为试验对象进行急性毒性试验，以求得安全浓度，为该药物合理安全使用提供科学的参考依据。
| 一、材料和方法 |
1. 试验用鱼
异育银鲫，规格约为16.5±3.1g，体长11.4±1.2cm，购自江苏大丰某养殖场。所选实验动物个体健康、规格基本一致，体表以及解剖观察健康。室内暂养1周，无死亡，实验前24h停喂。
2. 试验药品
25%聚六亚甲基胍（液体），购自上海黛龙生物工程科技有限公司。
3. 试验条件
实验用水为充分曝气3d的自来水，试验期间持续充气，溶氧在5mg/L以上，水温为16.5±2℃，pH6.9±0.1。实验在45cm×35cm×15cm的水族箱（体积约24L）中进行，期间不投喂饵料。每一水族箱中加入约15L已曝气水，并随机放入受试鱼10尾。
4. 实验方法
参照卢玲等、王明学等实验方法。在室内常温条件下，采用静水法生物测试，全天连续充气。为确定大致的试验浓度范围，先进行预备实验，不断重复试验缩小药物浓度范围，以此确定正式试验的浓度范围。根据预备试验结果按照等差间距确定正式实验浓度范围。选择7个浓度组（60、55、50、45、40、35、30mL/m3）和1个空白对照组，每组10尾受试鱼。实验药液先配成高浓度母液，再按要求稀释成所需的浓度，整个实验过程药浴96h，不更换药液，期间定时测定溶解氧等水质指标以监控水质，及时剔除死亡个体。观察记录鱼体反应和各个时间段（24h、48h、72h、96h）的死亡情况（以多次碰触无反应判定为死亡），以上试验重复3次，统计数据并计算相应时间段的半数致死浓度（Median-lethal Concentration,LC50），求出安全浓度（Safety Concentration,SC）。
5. 数据处理
用SPSS19.0软件统计所有数据并进行方差分析（one-way-ANOVA）。采用直线内插法，求出异育银鲫在聚六亚甲基胍药液的不同浓度中分别在24h、48h、72h、96h的半数致死浓度LC50及安全浓度（SC）。
LC50依据不同时间的死亡率求得，公式为：
LC50=C1+（50%-P1）×（C2-C1）/（P2-P1）
安全浓度（SC）=96h LC50×0.1
式中：C1、C2——死亡率近50%的低端和高端药液浓度；P1、P2——死亡率近50%的低端和高端死亡率。
| 二、实验结果 |
1. 异育银鲫的中毒症状
观察中发现，试验开始后8h内并无受试鱼死亡，在试验24h后异育银鲫出现死亡现象。鱼死亡前有一浮头过程，侧游、仰游，开始时受惊吓后会沉入水中，一段时间后对外界反应刺激不敏感，呼吸困难，呼吸时张大口和鳃盖，身体失去平衡，腹部朝上，最后沉入水底死亡。死亡后鳃盖张开，鳃丝前端布满白色小颗粒，体表分泌大量黏液，并有白色絮状粘附物，胸鳍前伸，口张大。
2. PHMG对异育银鲫的急性毒性
试验结果（表1）表明，在PHMG浓度为30mL/m3时，24h和48h的累计死亡率均为0；当PHMG浓度为40mL/m3时，72h和96h的累计死亡率均达到100%；整个实验过程中，对照组受试鱼的死亡率为0。异育银鲫的死亡率随PHMG浓度的升高、试验时间的加长而升高（图1）。
表1 PHMG对异育银鲫的急性毒性结果
图1 各个时间段异育银鲫在不同浓度的 PHMG药液中的累计死亡率
通过直线内插法求得，PHMG对异育银鲫24h、48h、72h、96h的LC50分别为52.5mL/m3、41.85mL/m3、37.12mL/m3、31.85mL/m3。96h的安全浓度为3.185mL/m3。
| 三、讨论 |
聚六亚甲基胍作为一种带正电荷的阳离子表面活性剂，不仅能吸附呈负电性的各类细菌病毒，还兼具絮凝作用，可吸附水体中的杂质以达到净化水质的效果。张玮等对几种海产养殖动物的毒性试验表明，聚六亚甲基胍对它们的毒副作用并不明显，可以将其应用于水产养殖环境消毒。此外，李锋等的研究还表明，在常规使用剂量下，聚六亚甲基胍对养殖水体中的单胞藻不会产生直接的抑制效应。而含氯制剂对藻类的影响比聚六亚甲基胍大的多。与目前生产上使用的含氯制剂等消毒剂相比，它具有刺激性弱、低毒安全、易溶解、性质稳定等优点，可更大程度的抑杀水体中的有害病原菌，能有效促进水产动物健康快速生长。
试验表明，聚六亚甲基胍对异育银鲫的96h安全浓度为3.185mL/m3，而在养殖生产中推荐使用剂量为鱼类是1～1.5mL/m3，虾、鳖类是0.5～1mL/m3，推荐剂量低于安全浓度，可放心使用。因此，作为一种水产消毒剂，PHMG值得推广应用。
本试验是在静水、连续微充气的小水体内进行，试验药物在生产条件下的作用效果还有待进一步研究。为了避免发生中毒事件，建议严格按照相关药物的产品指导进行安全施药，切勿任意加大剂量。在用药后3～5h应注意观察鱼体状态，并打开增氧机增氧，如出现不适等中毒症状时，立即采取换注新水、泼洒水质保护解毒剂等解救措施。
基金项目：国家重大科技成果转化项目（ZD－2012－345）；
上海高校知识服务平台项目（ZF1206）；
公益性行业(农业)科研专项经费（201203085）；
国家863计划项目（2011AA10A216）；
国家自然科学基金资助项目（31172430）
作者 | 俞军 孙琪 胡鲲 杨先乐
