免疫刺激剂（immunologic stimulant）是指能够调节动物免疫系统并激活免疫机能，增强机体对细菌和病毒等传染性病原体抵抗力的一类物质。多年来，国内、外均开展了将免疫刺激剂用于养殖水生动物传染性疾病预防的研究，其主要目的是为了将免疫刺激剂用于预防使用化学药物难于奏效的养殖水生动物的病毒和细菌性疾病。
1、免疫刺激剂的种类与特性
大量研究结果已经证明，对动物免疫系统具有调节和激活作用的物质很多种，能激活鱼、虾类免疫系统的物质也有很多种。根据其来源，大致可以分为来自细菌的肽聚糖和LPS、放线菌的短肽、酵母菌和海藻的β-1，3-葡聚糖和β-1，6-葡聚糖和来自甲壳动物外壳的甲壳质、壳多糖等具有免疫刺激活性的物质。
将上述各种具有免疫刺激活性物质投与鱼类时，可以提高鱼类体内溶菌酶和补体的活性，增加鱼体中补体的C3成分活性；不仅可以增强巨噬细胞和嗜中性白细胞的吞噬活性，而且还可以提高这些细胞的杀菌活性；激活自然杀伤细胞（NK），增强其杀伤异物细胞的活性外，还能促进巨噬细胞白细胞介素-2（IL-2）。除了能增强鱼类的非特异性免疫机能外，还具有增强机体产生特异性抗体的功能。对养殖虾类投与免疫刺激剂，首先是能提高虾体内大、小颗粒细胞的吞噬和杀菌活性，促进其血细胞趋化因子的释放；提高proPO活化系统的活性，从而增强其机体对各种传染性病原的抵抗力。
1.1、革兰氏阳性菌与菌体肽聚糖
革兰氏阳性菌的灭活菌体具有激活动物免疫机能的作用，其作用的主效成分是菌体细胞壁中的肽聚糖类物质。并非所有的革兰氏阳性菌均具有这种功能，而只有特定的菌种和特定的菌株具有对动物免疫系统的免疫刺激功能。
将革兰氏阳性菌嗜热双歧杆菌（Bifidobacterium thermophilum）细胞壁中提取的肽聚糖定量投喂养殖鱼类后，在提高鱼体的巨噬细胞和嗜中性白细胞的吞噬能力与过氧化物酶活性的同时，还能增强鱼体体液中溶菌酶的活性。对养殖对虾投与这类物质可以提高其粒细胞的吞噬活性并增加细胞中超氧化歧化酶的生成量，同时提高酚氧化酶的活性。由于这类免疫刺激剂能激活养殖水生动物的免疫机能，已经有试验结果证明，定量给予这类物质可以提高虹鳟（Oncorhynchus mykiss）对弧菌病、五条鰤（Seriola quinqueradiata）对链球菌病和日本对虾（Penaeusjaponicus）对弧菌病与病毒性血症的抵抗力。
1.2、革兰氏阴性菌与菌体脂多糖
将革兰氏阴性菌及其细胞壁中脂多糖（LPS）投与鱼类后，可以增加鱼类血液中白细胞的数量和提高其吞噬活性。增强日本鳗鲡（Anguilla japonica）对爱德华菌病的抵抗力。用灭活的杀对虾弧菌（Vibrio penaeicida）的菌体注射、浸泡和投喂日本对虾，可以促进供试对虾体内产生血细胞趋化因子和提高血细胞的吞噬活性，增强日本对虾对弧菌病的抵抗力。
1.3、放线菌的短肽
从放线菌橄榄灰链霉菌（Streptomyces olivogriseus）的培养液中提取的短肽类物质，定量投与鱼类后可以提高供试鱼的巨噬细胞的吞噬活性和杀菌能力，能增强虹鳟对肾脏病等传染性疾病的抗病力。
1.4、酵母菌与菌体多糖
酵母菌的细胞壁中存在大量的β-1，3-萄聚糖、β-1，6-萄聚糖和甘露聚糖（mannan）等多糖类物质，尤其是含有较多的β-1，3-萄聚糖。将从酵母菌中提取的β-1，3-萄聚糖投与鱼体，可以提高鱼体内巨噬细胞及其其它白细胞的吞噬和杀菌活性，同时还可以提高IL-2和补体的活性。将啤酒酵母菌细胞壁成分投与对虾，也可以提高血细胞的吞噬活性、酚氧化酶和超氧化歧化酶的产生能力。通过激活免疫机能，可以使斑鮰（Ictalurus punctatus）对迟缓爱德华菌（Edwardsiella tarda）病、鲑科鱼类对肾脏病和弧菌病的抗病力。安琪酵母股份有限公司生产的酵母免疫多糖（其中主要含有β-葡聚糖≥20%，α-甘露聚糖肽≥20%，肽类及蛋白质≥30%，几丁质≥2.0%等），经过对南美白对虾（Penaeus vannawei）、克氏原螯虾（Procamgbarus clarkii）、中华绒螯蟹（Eriocheri sinensis）、黄鳝（Monopterus albus）、日本鳗鲡（Anguilla japanica）、异育银鲫（Carassius auratus gibelio）和中华鳖（Pelodiscus sinensis）等养殖水生动物的大量试验研究证明，该产品对多种养殖水生动物的免疫系统有良好的刺激作用，是一种优质免疫刺激剂。
1.5、真菌与真菌多糖
将从蘑菇中提取的β-1，3-萄聚糖投与鱼类后，可以增强供试鱼白细胞吞噬活性，提高补体和溶菌酶的活性，促进特异性抗体的生成。将这种β-1，3-萄聚糖投与对虾后，也可以增强血细胞的吞噬活性和提高酚氧化酶的活性。由于免疫刺激剂激活了免疫机能，可以有效地预防鲤（Cyprinus carpio）的气单胞菌病、五条鰤的链球菌病和日本对虾的弧菌病与病毒性血症。
1.6、海藻与海藻多糖
将从海带中提取的β-1，3-萄聚糖添加在培养液中，可以刺激鲑（Salmo salar）的巨噬细胞产生超氧化歧化酶。此外，髓藻属的多种海藻、苏萨海带、帕纳普海带和裙带菜属的一些种类中的热提取物，投与鱼类后，利用在实验室条件下的攻毒试验，证明日本鳗鲡对E. tarda，五条鰤对链球菌的抵抗力明显上升。
1.7、甲壳质与壳多糖
从甲壳类和昆虫的外壳中提取的甲壳质与壳多糖，投与鱼类后，可以增强供试鱼的白细胞吞噬活性和杀菌能力，提高体内溶菌酶活性和对各种传染病的抵抗力。
1.8、其它免疫刺激剂
如左旋咪唑等化学合成物质，本来是作为杀虫剂使用的，现在已经研究结果证明这种物质还具有增强鱼类白细胞的吞噬活性和杀菌活性，使溶菌酶的活性上升，提高虹鳟对弧菌病的抵抗力。从中草药中提取的许多成分，如干草素、莨菪碱等也已经被初步的试验研究结果证明，是很有开发前景的水产用免疫刺激剂。
2、养殖鱼、虾类的免疫机制
养殖水生动物的免疫机制可以分为特异性和非特异性免疫。所谓非特异性免疫就是机体对非特定的病原体的防御机制。其中分布在鱼类体表粘液，血液和肾脏等器官中的溶菌酶（lysozyme），就是一种在补体（complement）的协同作用下，可以将细菌溶解而杀死的酶。补体是存在于鱼类粘液和血液中的一组蛋白质，其活化途径有两条：一是能被抗原抗体复合物激活的经典激活途径，二是能被与抗体无关的细菌LPS和肽聚糖等激活的替代途径。无论哪种途径活化的补体都能将菌体溶解。鱼类的补体与哺乳动物的相比，后者通过替代途径发挥的作用更大。在细胞性防御因子方面，由吞噬细胞将进入机体内的病原体吞噬后，依靠存在于巨噬细胞、嗜中性白细胞中的过氧化物酶等将病原体杀死、消化，同时还包括能对异体细胞和病毒感染细胞具有杀伤活性的天然杀伤细胞（NK）。所谓特异性免疫机制，是针对特异性病原的由T淋巴细胞和与T细胞相关联的能产生抗体的B淋巴细胞所发生的体液性免疫组成的。
虾类虽然没有产生抗体的机能，但是，也是依靠细胞性和体液性防御因子完成机体的免疫防御过程。细胞性防御因子主要包括血细胞和淋巴样器官等固着性细胞。血细胞又可以分为大颗粒细胞，小颗粒细胞和无颗粒细胞等3种类型。其中大、小颗粒细胞已被确认具有较强的吞噬活性。对于大型病原体及进入机体内的大量细菌，当血细胞无法吞噬时，即可能形成血细胞层而将其包围，在组织细胞的协助下形成球状物，将异物与周围的细胞隔开。淋巴样器官是位于中肠腺前方的小组织，是能捕捉进入体内的异物而保护机体的主要器官。液性防御因子主要包括酚氧化酶前体（proPO）活化系统，植物凝血素和杀菌素等。所谓proPO活化系统，就是虾类血细胞中存在的proPO被细菌的LPS，霉菌的β-1，3-葡聚糖等激活，经过丝氨酸蛋白酶而形成酚过氧化物酶，将鱼虾类体内的酪氨酸和二羟基苯丙氨酸等酚系物质氧化，最终生成黑色素的一系列反应。作为这个串联反应中间产物的苯醌和最终产物的黑色素，可以起到包围进入机体的异物而将其杀灭的作用。
3、免疫刺激剂的正确使用方法
每一种免疫刺激剂的有效剂量都存在使用上限和下限，我们完成的大量试验结果证明，对养殖水生动物采用间隔一定时间定期投与免疫刺激剂较长期连续投的效果更好，而且只有在投与量和方法正确的前提下，免疫刺激剂才能正常地发挥作用。从B. thermophilum菌中提取的肽聚糖，每天按0.2 mg/kg.体重的剂量投与，对鱼、虾是适宜的剂量，如果每天按该剂量的10倍投与，供试鱼、虾的免疫系统的机能就会趋于与未使用免疫刺激剂的对照组相同。此外，用该物质作为鱼、虾的免疫刺激剂时，采用连续投喂4 d停用3 d或者连续投喂7 d停用7 d的投与方式，其效果较连续投喂好。
关于免疫刺激剂投与的时间与期间，如果能做到在养殖水生动物传染性疾病的发生季节来临之前投喂一段时间为好。其理由是在免疫刺激剂的实际使用时，投与的免疫刺激剂刺激养殖水生动物免疫防疫机能上升到比较高的水平，但是其免疫机能长期维持在高水平时，可能会导致免疫机能的疲劳与麻痹，直接导致免疫刺激剂作用逐渐消失。如采用安琪酵母股份有限公司生产的酵母免疫多糖作为养殖水生动物的免疫刺激剂时，在各种传染性疾病的流行高峰来临之前，可以采用连续投与的方式，而在一般养殖时期则可以采用连续投与3周，间隔数周后再进行第2个投喂周期的方式进行。
需要特别注意的是免疫刺激剂是通过激活养殖水生动物的免疫系统而发挥抗传染病的功能的，如果养殖水生动物的免疫系统已经衰弱至不能激活的状态，免疫刺激剂也就难以发挥其作用了。所以，从改善养殖水生动物的饲养环境、加强营养和饲养管理入手，尽量减少抑制养殖水生动物免疫系统的环境因素，是提高免疫刺激剂使用效果的重要途径。
（作者：华中农业大学 陈昌福 胡 明 李 景 江苏省水生动物疾病预防控制中心方苹 陈辉）
